熒光分光光度計是用于掃描液相熒光標記物所發(fā)出的熒光光譜的一種儀器。其能提供包括激發(fā)光譜、發(fā)射光譜以及熒光強度、量子產(chǎn)率、熒光壽命、熒光偏振等許多物理參數(shù)，從各個角度反映了分子的成鍵和結構情況。熒光分光光度計具有靈敏度高、選擇性強、用樣量少、方法簡便、工作曲線線形范圍寬等優(yōu)點，可以廣泛應用于生命科學、醫(yī)學、藥學和藥理學、有機和無機化學等領域。
熒光分光光度計工作原理：
由光源氙弧燈發(fā)出的光通過切光器使其變成斷續(xù)之光以及激發(fā)光單色器變成單色光后，此光即為熒光物質(zhì)的激發(fā)光，被測的熒光物質(zhì)在激發(fā)光照射下所發(fā)出的熒光，經(jīng)過單色器變成單色熒光后照射于測樣品用的光電倍增管上，由其所發(fā)生的光電流經(jīng)過放大器放大輸至記錄儀，激發(fā)光單色器和熒光單色器的光柵均由電動機帶動的凸輪所控制，當測繪熒光發(fā)射光譜時，將激發(fā)光單色器的光柵，固定在適當?shù)募ぐl(fā)光波長處，而讓熒光單色器凸輪轉動，將各波長的熒光強度訊號輸出至記錄儀上，所記錄的光譜即發(fā)射光譜（emissionspectrum），簡稱熒光光譜。
熒光分光光度計測試注意事項：
①樣品應盛在四面透光的石英比色皿（熒光池）中，如果是揮發(fā)性樣品應使用帶塞的熒光池。
②在熒光分析時，為了得到穩(wěn)定可靠的數(shù)據(jù)，一般需要開機預熱氙燈大約30min。如果儀器光源采用的是閃爍氙燈，預熱時間可以縮短到10min左右。對某些易感光、易分解的熒光物質(zhì)，盡量采用長波長、低人射光強度及短時間光照。
③溫度變化可引起熒光強度的改變。通常降低溫度，有利于提高熒光量子產(chǎn)率，熒光強度增大。溫度影響熒光強度的顯著程度因樣品而異，大部分熒光物質(zhì)的熒光強度受溫度影響不大，測試溫度變化不超過±3℃，對測試結果幾乎無影響。
④當熒光物質(zhì)是弱酸或弱堿時，溶液的pH對熒光強度有較大影響。因為弱酸或弱堿在不同酸度中，分子和離子的電離平衡會發(fā)生改變，而熒光物質(zhì)的熒光強度會因其離解狀態(tài)發(fā)生改變。
⑤熒光物質(zhì)分子與溶液中其它物質(zhì)分子之間作用導致熒光強度降低，常見的熒光猝滅劑，如鹵素離子、重金屬離子、02、硝基化物質(zhì)、重氮化合物等。溶液中的溶解氧也能引起幾乎所有的熒光物質(zhì)產(chǎn)生不同程度的熒光熄滅現(xiàn)象，因此，在較嚴格的熒光實驗中必須除02。
